E.m.b. Agar (con Eosina Y Azul.pdf 34254g

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E.M.B. Agar (con Eosina y Azul de Metileno) Uso Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. Fundamento El medio de cultivo combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente solidificante. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. También, pueden crecer especies de Candida y se observan como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas se observan como colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella. Contenido y composición Código B0410184: 6 frascos x 50 ml. Código B2310131: envase x 10 placas. FÓRMULA Peptona ..............................................................................................................................10.0 g Lactosa.................................................................................................................................... 5.0 g

Instrucciones Medio de cultivo listo para usar en frascos Colocar los frascos cerrados en baño maría y llevar a ebullición para fundir el medio de cultivo sólido contenido en los mismos. Una vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar cuidadosamente los frascos del baño maría y dejar enfriar. Cuando alcanzan temperatura 45-50 ºC, abrirlos y distribuir aproximadamente 15 ml en placas de Petri estériles. Placas listas para usar. Características del producto Medio de cultivo color púrpura vinoso. Nota: en el caso del medio de cultivo listo para usar en frascos, durante la esterilización se reduce el azul de metileno al color naranja. El color púrpura se restaura por agitación. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo. Almacenamiento Medio de cultivo listo para usar en frascos a 10-35 ºC Medio de cultivo listo para usar en placas a 2-8 ºC Procedimiento Siembra En superficie, por estriado directo a partir de la muestra. En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas. Incubación En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas. Interpretación de los resultados Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico. Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio, incoloras.

Sacarosa............................................................................................................................... 5.0 g Fosfato dipotásico ................................................................................................ 2.0 g Eosina......................................................................................................................................... 0.4 g Azul de metileno............................................................................................... 0.065 g Agar ..........................................................................................................................................13.5 g Agua purificada..................................................................................................1000 ml pH final: 7.2 ± 0.2

HOJA 1 DE 2

E.M.B. Agar (con Eosina y Azul de Metileno) Control de Calidad Microorganismos

CRECIMIENTO

Características de

Satisfactorio

Negro azuladas con brillo

Satisfactorio

Negro azuladas con brillo

Satisfactorio

Mucosas confluentes,

las colonias Escherichia coli

metálico

ATCC 25922 Escherichia coli

- Durante la esterilización el azul de metileno puede precipitar. Es importante resuspender el precipitado mientras se distribuye en placas de Petri estériles el medio preparado. - Conservar el medio preparado en placas a 2-8 ºC y protegido de la luz ya que los indicadores presentes son fotosensibles y pueden inhibir el desarrollo de algunas especies de Proteus si no se conservan apropiadamente.

metálico

ATCC 8739 Klebsiella pneumoniae

con centro oscuro

ATCC 700603 Satisfactorio

Incoloras

Satisfactorio

Incoloras

Satisfactorio

Incoloras

Satisfactorio

Incoloras

Inhibición parcial

Incoloras puntiformes

Inhibición parcial

Rosadas puntiformes

Inhibido

---

Proteus mirabilis ATCC 43071 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Shigella flexneri ATCC 12022 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Candida albicans ATCC 10231 Staphylococcus aureus ATCC 25923

CONTROL DE ESTERILIDAD

RESULTADO

Medio sin inocular

Sin cambios

Precauciones - Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo. - No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o dañado. - No utilizar el producto si existen signos de contaminación o deterioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento. - Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto. - Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad establecidas por el laboratorio. - Las características del producto pueden alterarse si no se conserva apropiadamente. - Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del mismo según reglamentaciones vigentes. Referencias - Holt-Harris and Teague. 1916. J. Infect. Dis. 18:596. - Levine. 1918. J. Infect. Dis. 23:43. - MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-identificationmaintenance of medical bacteria, volume 1. Williams & Wilkins, Baltimore, Md. Indicaciones al consumidor Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento. Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.

02/2010 - REV .00

Limitaciones - En el caso de los microorganismos fermentadores, no se puede diferenciar el carbohidrato metabolizado. - Este medio de cultivo es moderadamente inhibitorio ya que las cepas de enterococo y candida pueden desarrollar en el mismo, observándose como colonias de tamaño puntiforme. - Para la identificación de género o especie microbiana se deben realizar pruebas bioquímicas adicionales. - Algunas cepas de Salmonella y Shigella no crecerán en EMB Agar.

Materiales necesarios no provistos Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requerimiento.

SÍMBOLOS UTILIZADOS HOJA 2 DE 2 DIAGNÓSTICO IN VITRO

CÓDIGO Nº

ELABORADOR

LABORATORIOS BRITANIA S.A. LOS PATOS 2175 (C1283ABI) CABA - ARGENTINA TEL/FAX 54 11 4306 0041

ESTÉRIL

Nº DE DETERMINACIÓNES

LOTE Nº

FECHA DE VENCIMIENTO

LÍMITE DE TEMPERATURA

INSTRUCCIONES DE USO